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【应用分享】发酵液中2'-岩藻糖基乳糖的液相分析

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国家卫健委食品安全标准与监测评估司于2023年10月7日发布公告，正式批准2’-岩藻糖基乳糖（2’-FL）和乳糖-N-新四糖（LNnT）可作为食品营养强化剂添加到婴幼儿配方乳粉、调制乳粉以及特殊医学用途婴儿配方食品中。2’-岩藻糖基乳糖（2’-FL）是母乳寡糖（human milk oligosaccharides, HMOs）的主要成分。HMOs是母乳中第三丰富的固体成分（仅次于脂肪和乳糖），在调节肠道菌群和免疫调节等方面发挥重要作用。HMOs的生产以微生物发酵法为主，通过基因工程和一系列化学技术获得高纯度的HMOs原料。但由于HMOs复杂组成和分子结构，目前多数国家也仅有2’-FL和LNnT被批准用于婴配粉中。

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一、参考标准

图片

食品安全国家标准

本文参照《桃胶等15种“三新食品”的公告文本》中附录A中2’-FL的检验方法，采用ChromCore HILIC-Amide色谱柱，分别参考亲水保留色谱柱色谱条件和酰胺键合柱色谱条件对2’-岩藻糖基乳糖（2’-FL）的发酵液及其终产品原料进行分离分析。



二、实验方法 

样品溶液制备

01

1）亲水保留色谱柱色谱条件样品溶液的配制：

发酵液1：准确移取脱色、含菌体的2’-岩藻糖基乳糖发酵液，用乙腈1：1稀释，混匀，4000 r/min离心5 min后取上清。

发酵液2：准确移取脱色、含乳糖和甘油的2’-岩藻糖基乳糖发酵液，用乙腈1：1稀释，混匀，4000 r/min离心5 min后取上清。

2'-岩藻糖基乳糖样品：准确称取适量2’-岩藻糖基乳糖粉末（95%），用水溶解。根据粉末的纯度折算，配制成50 mg/mL的2’-岩藻糖基乳糖溶液。

2）酰胺键合柱色谱条件样品溶液的配制：

2’-岩藻糖基乳糖（5 mg/mL）：准确称取适量2’-岩藻糖基乳糖粉末（95%），用50%乙腈溶解。根据粉末的纯度折算，配制成5 mg/mL的2’-岩藻糖基乳糖溶液。

2’-岩藻糖基乳糖（5 mg/mL）+D-乳糖（1 mg/mL）：准确称取适量D-乳糖对照品，用含5 mg/mL 2’-岩藻糖基乳糖的50%乙腈溶解，配制成每1 mL中含5 mg的2’-岩藻糖基乳糖和1 mg的D-乳糖溶液。

色谱条件及分离结果

02


1）亲水保留色谱柱色谱条件实验谱图：

image.png

表1 2’-岩藻糖基乳糖发酵液的分离结果

峰号

峰名称

保留时间

(min)

拖尾因子

(USP)

理论塔板数

(USP)

分离度

(USP)

1

D-乳糖

9.212

0.92

12655

/

2

2’-岩藻糖基乳糖

11.415

0.86

10251

5.66

3

二岩藻糖基乳糖

14.987

1.04

10322

6.86

2）酰胺键合柱色谱条件实验谱图：

image.png

表2 2’-岩藻糖基乳糖发酵液的分离结果

峰号

峰名称

保留时间

(min)

拖尾因子

(USP)

理论塔板数

(USP)

分离度

(USP)

1

D-乳糖

2.808

1.15

4774

/

2

2’-岩藻糖基乳糖

3.062

1.17

6682

1.62

3

二岩藻糖基乳糖

3.452

1.21

7784

2.55



实验结论

本文参考2’-岩藻糖基乳糖检测标准，在ChromCore HILIC-Amide色谱柱上分别采用亲水保留色谱柱的色谱条件和酰胺键合色谱柱的色谱条件，测试2’-岩藻糖基乳糖成品及其不同工艺阶段的发酵液样品，对成品和不同发酵液样品中D-乳糖、2’-岩藻糖基乳糖和二岩藻糖基乳糖均实现良好分离，且不受其他基质成分干扰。另外采用酰胺键合色谱柱的色谱条件测试，分析时间相比标准更短。

因此，采用纳谱分析的ChromCore HILIC-Amide色谱柱可用于以乳糖等为原料，经发酵、提纯、干燥等工艺制得的营养强化剂2’-岩藻糖基乳糖的含量测定。



相关产品信息


常规规格货号

产品描述

货号

ChromCore HILIC-Amide 5μm, 4.6×250mm

A068-050012-04625S

ChromCore HILIC-Amide 3μm, 4.6×150mm

A068-030012-04615S

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