【知识分享】如何从色谱图中分析气相柱「柱流失」的规律?
在使用气相柱的时候,大家有没有碰到过固定相流失的情况呢?固定相的流失对于气相色谱分析的影响非常大,如会导致基线不平、产生毛刺、柱效降低、分离度减小、样品的保留时间减小、出现明显的杂峰干扰、污染检测器等等问题。
今天,我们来分析一下造成色谱柱「柱流失」的规律,可以让我们在今后实验中更好的避免柱流失的发生。
1.固定相极性越高,柱流失越大;
2.固定相液膜越厚,柱流失越大;
3.柱长越长,柱流失越大;
4.高温下,固定相的分解会加快。因此,高温时的柱流失会比低温时高;
5.氧气是许多固定相分解的催化剂,特别是在高温时段,强调载气的纯度和色谱柱安装的气密性,一方面就是出于氧气会加剧柱流失的考虑。在实验的过程中还需要注意一点,柱温箱升温之前必须先通载气,否则色谱柱处于“干烧”的状态,会造成非常严重的固定相流失。同理,实验结束之后,确保柱温箱冷却后再关闭载气;
6.此外,色谱柱随着使用次数和时间的增加,固定相的稳定性最终也会发生不可逆的变化,导致柱流失的增加。
真正的柱流失来源只应该是色谱柱。实验人员所观察到的流失实际上是到达检测器的所有信号的总和,包含了以下来源:载气、进样口隔垫、进样口、色谱柱和检测器,但实验人员有可能将以上所有流失来源都错误的归结为色谱柱的流失。
如果有GC-MS,则可以通过离子峰的质荷比来判断相应离子是否来自于柱流失。
柱流失会随着温度的升高加剧。我们可以通过流失曲线或谱图清楚地看到这种变化。一般我们会在气相柱充分老化后按程序升温的条件下做一次空白试验,温度要升至色谱柱的温度上限,并持续该温度10~15分钟,这样就可以得到该色谱柱的正常流失曲线图。从流失图中我们可以得到几个重要的指标。空白试验的基线在较低温度区域相对平坦,到离温度上限30~40 ℃时开始急速地上升,直至达到温度上限;在上限温度持续期间,基线又变得平稳许多,几分钟后基线会又变得完全平坦。如出现明显或严重的偏差,则不是因色谱柱流失引起的。色谱柱的流失是一种持续的过程——并不会偶然地开始,也不会突然地停止。如果在空白试验中得到了色谱峰,这一般情况下并不是由于柱流失而引起的。如果使用质谱检测器进行检测并与谱库对照,您会发现它们是一些含硅的化合物,它们的来源极有可能是进样垫。柱流失一般表现为随着温度的升高基线产生偏移的情况,一般不会有峰出现,除非是因为进样问题引起的柱流失才会出现比较明显的峰,如进了水样,柱子的固定相会因为水的作用而产生较多的流失后形成峰,隔垫流失一般会出现呼吸峰,即出峰时间间隔相同的峰,那种等间距的峰是聚合物热裂解的特征峰形。要判断是不是隔垫流失很简单,只要降低进样口温度再进样,如果峰消失,则说明很有可能是隔垫流失,如果还有峰出现,说明不是隔垫流失造成的。一般来说,极性固定相的流失率较高,较低温度下,它们的流失就已很明显。如果你使用的检测器对固定相中任何原子或功能团有特别灵敏的响应,那么柱流失就非常明显了。就算柱流失不是很严重,但由于检测器对柱内降解产物有较灵敏的响应,会导致很强的基线噪声。在氰丙基取代聚硅氧烷固定相与NPD系统或聚乙二醇柱与ECD系统中,这种现象就很突出。由流失图中我们可以看到,在高温区域柱流失会迅速升高。柱流失的测量方法是测量在两种温度下,背景信号的不同或改变。通常我们会选择色谱柱的温度上限和100 ℃这两个点的背景信号(整个GC系统背景的组合),我们不可能测量出柱流失对这个信号有多大的贡献。而测量柱流失的相对数量,其它对背景信号有贡献的因素也就被减去了。大多数的色谱柱柱流失是通过FID进行检测的,流失水平就是在两种温度下FID信号值的差(ΔpA)。由于这些数值随检测器响应的变化而变化,所以只有在相同的实验条件下使用同一个检测器,或者在标准的流量条件下使用相同标准状态的检测器,这样做出的数据才真实有效。
随着色谱柱的使用,柱流失会不断地升高。色谱柱暴露于有氧环境(空气)中或持续在等于或接近色谱柱的上限温度条件下被使用,都会加速色谱柱的流失。柱流失突然或快速的升高则可能是色谱柱有损坏或GC系统有问题出现。而持续在高于色谱柱上限温度下操作使用,持续使色谱柱暴露于有氧环境中(通常由于泄漏),或者不断分析的样品中有破坏性物质,这些都可能是问题的原因。
色谱柱温度极限:一根色谱柱通常有两个温度极限,温度下限和温度上限。如果在低于温度下限的条件下实验,得到的色谱峰又圆又宽(柱效降低)。但是色谱柱并不会受到什么损坏,这样并不能发挥色谱柱的正常功能。在达到下限温度或者高于下限温度时,得到的色谱峰会有明显的好转。
温度上限一般有两个固定的数值。较低的是恒温极限,在该温度下色谱柱可以正常地使用,柱的寿命不会受到影响。较高的数值是程序升温极限,在此温度下色谱柱使用时间如果在10~15分钟内,色谱柱的流失和寿命不会受到太大的影响。但如果持续时间过长,则会增加色谱柱的流失,缩短色谱柱的寿命,固定相和熔融石英管的惰性都有可能被破坏。
以上是使用某品牌5MS气相色谱柱的测试谱图,柱流失的峰与上面参考的特征离子碎片一致。
1.使用高纯气体(纯度99.999%以上)作为载气;2.净化载气,并定期检查净化装置是否需要更换,确保有效去除载气中的氧、水和碳氢化合物等杂质;3.所有气路中的材料和密封件最好为金属件(不含石墨垫、衬管和色谱柱),以防长期使用中漏气;4.养成良好的使用习惯,安装气相柱时先安装进样口端,打开载气,将气相柱检测器端插入溶剂中观察是否有连续的气泡产生,有连续气泡产生再开始老化气相柱操作;柱温箱升温之前必须先通载气;实验结束之后,需确保柱温箱冷却后再关闭载气。5.柱的使用温度尽可能低。选择柱温时,首先要保证不得超过气相柱固定相的使用温度极限,其次再根据样品组分沸点调节柱温。对于组分简单的样品,在保证组分充分分离前提下,一般采用低于样品的平均沸点10~40 ℃的柱温。对于组分复杂的样品,应采用程序升温的方式,终温以低于组分中最高沸点10~20 ℃为宜,但不能超过程序升温最高温度,并且持续时间不超过10 min;6.防止难挥发性物质进入气相柱,可以采取以下措施:a.进行样品预处理;b.使用填有石英棉的衬管;c.安装预柱等。
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