-
1
填写账户信息
-
2
填写基本信息
-
3
注册成功
连翘为木犀科植物连翘的干燥果实,含有大量挥发油和色素类成分,这些成分极易造成GC-MS/MS分析中目标物干扰大、保留时间漂移等问题,其中甲基对硫磷、甲基硫环磷、水胺硫磷、狄氏剂干扰较为明显;造成LC-MS/MS分析中目标物响应变低、干扰大、丢峰、无法准确定性等问题,其中地虫硫磷、水胺硫磷、甲拌磷砜干扰较为明显。纳谱分析推出的SelectCore HLB-C中药农残专用柱,特别适用于重色素和重油脂的中药材农残测定。
今天,我们来看看连翘项目的前处理效果吧。
适用范围
本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法二,适用于含色素、挥发油类成分的中药材的农残检测。
一 / 对照品溶液的制备
1.1 混合对照品配制
精密量取禁用农药混合1 mL,置20 mL量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀,备用;
1 .2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备
取磷酸三苯酯对照品适量,精密称定,加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液,即得。精密量取适量,加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。
1.3 空白基质溶液的制备
取空白基质样品,同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。
1.4 基质混合对照溶液的制备
分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份),置氮吹仪上,40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL,分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL,加乙腈稀释至1 mL,涡旋混匀,即得。
二 / 供试品溶液的制备
2.1 提取(直接提取法)
精密称取5 g样品(过3号筛),加氯化钠1 g,加入50 mL乙腈,匀浆处理2分钟,离心后分取上清液,残渣再加50 mL乙腈,匀浆处理1分钟,离心后,合并两次提取上清液,减压浓缩至3~5 mL左右,加乙腈定容至10 mL,摇匀,置冰箱冷藏2小时,取出离心1分钟,取上清液至新的离心管内,放置至室温待净化。
三 / 净化
GC/MS/MS样品净化:
SPE柱:SelectCore HLB-C固相萃取柱500mg/6mL
净化:取SelectCore HLB-C固相萃取柱,加乙腈5 mL活化,再取连翘提取液2 mL置已活化的SelectCore HLB-C固相萃取柱中,收集样品液,待所有样品液进入柱体填料后,取5 mL乙腈洗脱,合并样品液与洗脱液,置40 ℃水浴氮吹至2 mL,即得。
GC/MS/MS测定:
基质加标配制:精密量取上述氮吹后的样品溶液1 mL,氮吹至0.6 mL加入混合对照溶液,乙腈定容至1 mL,再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。
样品溶液配制:精密量取上述氮吹后的样品溶液1 mL加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。
LC/MS/MS样品净化:
SPE柱:SelectCore HLB固相萃取柱500mg/6mL
净化:量取上述连翘提取液4 mL,过SelectCore HLB固相萃取柱500mg/6mL,收集全部净化液,混匀,即得。
LC/MS/MS测定:
基质加标配制:精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL氮吹至0.6 mL加入混合对照品液,乙腈定容至1 mL,再加入0.3 mL水,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。
样品溶液配制:精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL加入0.3 mL水,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。
四 / 气相色谱-串联质谱法(岛津GC-MS-TQ8040 NX)
4.1 色谱条件
色谱柱:NanoChrom BP-50+MS气相柱30m×0.25mm×0.25μm
进样口温度:250 ℃
升温程序:初始温度为60 ℃,保持1 min
以10 ℃/min升温至160 ℃
再以2 ℃/min升温至230 ℃
最后以15 ℃/min升温至300 ℃, 保持6 min
载气:高纯氦气(纯度>99.999%)
进样方式:不分流进样
恒压模式:146 kPa
进样量: 1 μL
4.2 质谱条件
电离方式:电子轰击电离源(EI)
电离能量:70 Ev
接口温度:250 ℃
离子源温度:250 ℃
监测方式:多反应监测模式(MRM)
溶剂延迟:10.0 min
五 / 高效液相色谱-串联质谱法(岛津LC-MS 8045)
5.1 色谱条件
色谱柱:ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱 2.6μm, 2.1×100mm
流动相:
A:0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵)
B:乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵)=95:5
流速:0.3 mL/min
柱温:40 ℃
进样量:2 µL
梯度:
时间 (min) | 流速 (mL/min) | ||
5.2 质谱条件
离子源:电喷雾离子源(ESI)正离子扫描
监测方式:多反应监测模式(MRM)
离子源接口电压:4.5 kV
雾化气:氮气3.0 L/min
加热气:干燥空气10.0 L/min
DL温度:250 ℃
加热模块温度:400 ℃
接口温度:300 ℃
干燥气:N2 10 L/min
六 / 注意事项
GC-MS/MS:久效磷参考LC-MS/MS分析结果;内吸磷参考LC-MS/MS分析结果;甲基对硫磷定量离子为:125.0>47.0,CE:10(来源于2341第四法)。
LC-MS/MS:水胺硫磷参考GC-MS/MS分析结果;甲胺磷定量离子为:142.05>94.0;如遇个别目标物回收率低于60%可将上柱净化量增加为5 mL;由于基质中含有挥发油成分,自动进样器温度不宜设置过低,避免出现样品分层导致分析结果不准确。
七 / 实验结果
表 1 连翘中33种农药残留的测定添加回收结果(%)
八 / 实验结论
通过以上实验数据可以看出,连翘使用SelectCore HLB-C固相萃取柱对其色素类成分、挥发油吸附良好,有效地减轻了样品中色素和挥发油成分对GC-MS/MS柱前端的污染和基质中干扰物对目标物的影响;使用SelectCore HLB 500mg/6mL固相萃取柱处理的连翘LC-MS/MS基质加标液中目标物出峰良好,搭配上述解决办法有效地解决了连翘中农残分析中存在的问题,提高了实验效率,为连翘的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。