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【应用分享】中药广藿香的33种农残测定分析

广藿香为唇形科植物广藿香的干燥地上部分，含有大量色素类和挥发油类成分，这些成分极易造成GC-MS/MS柱前端污染、目标物漂移等问题；同样也会造成LC-MS/MS上目标物干扰，导致目标物响应变低等问题，其中地虫硫磷和甲拌磷砜被干扰较为明显。

今天，我们来看看广藿香项目的前处理效果吧。

适用范围

本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法二和固相萃取法三，适用于含色素、挥发油类成分的中药材的农残检测。

实验步骤

一 / 对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合1 mL，置20 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用；

1.2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份），置氮吹仪上，40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL，分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL，加乙腈稀释至1 mL，涡旋混匀，即得。

二 / 供试品溶液的制备

提取（直接提取法）：

精密称取5 g样品（3号筛），加氯化钠1 g，加入50 mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50 mL乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5 mL左右，加乙腈定容至10 mL，摇匀，待净化。

三 / 净化

GC-MS/MS样品净化：

SPE柱：SelectCore GCB/NH2-A固相萃取柱 500mg/500mg/6mL

净化：取SelectCore GCB/NH2-A固相萃取柱用乙腈：甲苯（3：1）10 mL活化，量取上述广藿香提取液2 mL，置已活化的SelectCore GCB/NH2-A固相萃取柱中，用乙腈：甲苯（3：1）20 mL洗脱，收集全部样品液与洗脱液，40 ℃水浴减压回收至2 mL，即得。


GC-MS/MS测定：

基质加标配制：精密量取上述减压回收后的样品溶液1 mL，氮吹至0.6 mL加入混合对照溶液，乙腈定容至1 mL，再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

样品溶液配制：精密量取上述减压回收后的样品溶液1 mL加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

LC-MS/MS样品净化：

SPE柱：SelectCore HLB固相萃取柱500mg/6mL

净化：量取上述广藿香提取液4 mL，过SelectCore HLB固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得。

LC-MS/MS测定：

基质加标配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL氮吹至0.6 mL加入混合对照品液，乙腈定容至1 mL，再加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

样品溶液配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

四 / 气相色谱-串联质谱法（岛津GC-MS-TQ8040 NX）

4.1  色谱条件

色谱柱：NanoChrom BP-50+MS,30m×0.25mm×0.25μm；

进样口温度：250 ℃

升温程序：初始温度为60 ℃，保持1 min；       

                  以10 ℃/min升温至160 ℃；

                  再以2 ℃/min升温至230 ℃; 

                  最后以15 ℃/min升温至300 ℃, 保持6 min；

载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；

进样方式：不分流进样；

恒压模式：146 kPa；

进样量：   1 μL

4.2  质谱条件 

电离方式：电子轰击电离源（EI）；

电离能量：70 Ev；

接口温度：250 ℃；

离子源温度：250 ℃；

监测方式：多反应监测模式（MRM）；

溶剂延迟：10.0 min

五 / 高效液相色谱-串联质谱法（岛津LC-MS 8045）

5.1  色谱条件

色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides 2.6μm,  2.1×100mm;

流动相：

    A：0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）

    B：乙腈-0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）=95:5

流速：0.3 mL/min

柱温：40 ℃

进样量：2 µL

梯度：

时间

(min)

流速

(mL/min)

流动相A
(%)
流动相B
(%)
0
0.3
70
30
1
0.3
70
30
12
0.3
0
100
14
0.3
0
100
14.1
0.3
70
30
16
0.3
70
30


5.2  质谱条件

离子源：电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描

监测方式：多反应监测模式（MRM）

离子源接口电压：4.5 kV

雾化气：氮气3.0 L/min

加热气：干燥空气10.0 L/min

DL温度：250 ℃

加热模块温度：400 ℃

接口温度：300 ℃

干燥气：N2 10 L/min

六 / 注意事项

GC-MS/MS：久效磷参考LC-MS/MS分析结果；内吸磷参考LC-MS/MS分析结果；杀虫脒参考LC-MS/MS分析结果 ；

LC-MS/MS：如遇甲拌磷砜和地虫硫磷响应过低可采用GC-MS/MS来分析此化合物（检测条件见下表），由于使用33种农残混标定位甲拌磷砜在GC-MS/MS上出峰时间时使用以下4组离子对在甲拌磷砜相邻时间段内有多个化合物均有响应，为避免定位不准确务必使用甲拌磷砜单标对照品来定位；水胺硫磷参考GC-MS/MS分析结果；如遇个别目标物回收率低于60%可将上柱净化量增加到5 mL。

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七 / 实验结果

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广藿香基质加标GC-MS/MS部分化合物分析结果谱图

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广藿香基质加标LC-MS/MS部分化合物分析结果谱图

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表1  广藿香中33种农药残留的测定添加回收结果（%）

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八 / 实验结论

通过以上实验数据可以看出，广藿香使用SelectCore GCB/NH2-A固相萃取柱处理对其色素类和挥发油类成分吸附良好，有效地减轻了样品中色素成分对GC-MS/MS柱前端的污染，基质加标中各目标物保留时间稳定；使用SelectCore HLB 500mg/6mL固相萃取柱处理的广藿香LC-MS/MS基质加标液中化合物出峰良好，有效地减轻了由于样品中挥发油导致的目标物响应低的问题；搭配上述解决办法有效地解决了广藿香农残检测中存在的问题，提高了实验效率，为广藿香的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。



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