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图1.HPLC梯度开始时,疏水性物质在色谱柱柱头被吸附保留
1、水
纯水仪中的水是纯净的,但如果没有得到适当的清洁和维护,去离子和纯化装置中的水很可能含有细菌。细菌会产生废物并分解产生大量紫外线活性化合物,这些化合物会在梯度分析中产生鬼峰。
2、流动相容器浸出物
1)流动相接触的设备,使用干净干燥的玻璃器皿,避免在流动相制备和储存过程中使用塑料设备;
2)自动进样器小瓶瓶盖内的隔膜,隔膜中的小碎片会沉积到样品液里,甚至挥发性样品可能会从完好无损的瓶盖中浸出增塑剂和其他成分。
3、有机溶剂
在进行痕量分析或使用较低紫外波长进行检测时,溶剂的质量变得尤为重要,不同品牌溶剂都有可能会存在痕量杂质带来鬼峰干扰。
4、试剂和添加剂
缓冲盐的纯度范围很广,其中有些不适合HPLC。乙酸铵等潮解盐的纯度可能会随着时间的推移而降低,塑料瓶和塑料盖为包装的盐可能会受到浸出物的影响。避免使用质量较差的盐类和添加剂,尽可能避免在塑料瓶中储存或评估浸出物的影响,并仔细控制储存条件和保质期。使用更纯净的流动相添加剂,并运行检查梯度以评估流动相添加剂导致鬼峰的可能性。
5、系统污染
系统中积累的样品污染物会随着有机相含量的变化而渗入流动相中,并通过梯度聚集在整个色谱图中形成色谱峰。必须确保定期清洁和维护系统中的易污染区域,例如针座、转子密封件和毛细链接管内表面。
6、柱流失
虽然大多数色谱柱在适当的操作条件下都相当稳定,但一些小基团键合相往往存在更高的流失问题。这类色谱柱使用和储存一定要遵循厂家建议。
鬼峰解决方案—鬼峰去除柱
纳谱分析特别研发出鬼峰小柱——NanoChrom Ghost-Remover鬼峰去除柱,能够去除流动相以及管路和混合器中的杂质,有效清除鬼峰干扰,从而大大缩短方法验证和微量、痕量物质的分析时间。对于药物分析研发人员而言,NanoChrom Ghost-Remover鬼峰去除柱是您必备的鬼峰消除神器。
● Ghost-Remover鬼峰去除柱的主要特点是能去除溶剂包括有机溶剂中的杂质;
● 去除有效管路和混合器中的杂质。
○ 鬼峰去除柱实际寿命依据分析条件例如使用的流动相不同而有所差别,并不是所有的杂质都可以被清除;
○ 将该产品连接在梯度混合器或泵的汇合处之后,梯度分析将存在和小柱容积等同的延迟体积,因此在梯度分析时,建议延长分析的后平衡时间以确保色谱重现性,几乎所有品牌液相仪器都可使用本产品;
○ 当将质谱作为检测器时,鬼峰去除柱可能会有少许溶出引起基线噪声;
○ 在分析中如果使用离子对试剂时,鬼峰去除柱可能会吸附离子对试剂影响组分的保留时间或者峰型;
○ 在连接分析柱之前,务必用流动相彻底冲洗连接该产品的管路(接近梯度分析中的最终浓度)。
参考文献:
1. Tony Taylor, The LCGC Blog: Ghost Peaks in Gradient HPLC (2017).
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