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当前位置：首页>服务与支持>案例分享>中药农残测定
高挥发油中药蛇床子的33种农残测定分析

蛇床子为伞形科植物蛇床的干燥成熟果实，含有大量的挥发油、香豆素类成分，这些成分对GCMSMS分析中个别农残化合物保留时间漂移严重，LCMSMS分析中个别农残化合物干扰大，农残线性和回收率较差。常规的固相萃取法一、固相萃取法二、固相萃取法三都不能很好的净化。

纳谱分析近期针对以上含挥发油和色素样品分析存在的问题，在改进填料的吸附能力的同时，推出了一种组合固2前处理方法。相比常规固相萃取方式，优化后的两种HLB固相萃取柱可以有所针对性的吸附更多色素、挥发油类成分，从而降低了样品中色素对色谱柱的污染和挥发油引起的基质效应，有效的提高了样品分析时农残目标物的准确性。

今天，我们来看看蛇床子项目的前处理效果吧。

适用范围

本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法2，适用于含有挥发油、色素类基质干扰大和色素较多的中药材农残检测。

实验步骤

一

对照品溶液的制备

1对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合1mL，置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用；

1 .2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1mL含1.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1mL含0.1μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份），置氮吹仪上，40°C 水浴浓缩至约0.6mL，分别加入混合对照品溶液10μL、20 μL、50 μL、100μL、150μL、200μL，加乙腈稀释至lmL，涡旋混匀，即得。

二

供试品溶液的制备

2.1 提取

精密称取5g样品（3号筛），加氯化钠1g，加入50mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50mL乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5mL，加乙腈定容至10mL，摇匀，待净化。

三

净化

GCMSMS样品：

  • SPE柱：SelectCore HLB-A中药农残专用柱200mg/6mL

  • 净化：量取上述蛇床子提取液5mL，过SelectCore HLB-A中药农残专用柱200mg/6mL，收集全部净化液，混匀，即得。

  • GC/MS/MS测定：精密量取过固相萃取柱氮吹定容后的溶液1mL，氮吹至0.4mL加入混合对照溶液，乙腈定容至1mL，再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22μm尼龙针式过滤器，上机分析。

LCMSMS样品：

  • SPE柱：SelectCore HLB-B中药农残专用柱200mg/6mL

  • 净化：量取上述蛇床子提取液3mL，过SelectCore HLB-B中药农残专用柱200mg/6mL; 30/pkg，收集全部净化液，混匀，即得。

  • LC/MS/MS测定：精密量取过固相萃取柱后溶液1mL氮吹至0.4mL加入混合对照品液，乙腈定容至1mL，再加入0.3 mL水，混匀，过0.22μm尼龙针式过滤器，上机分析。

四

处理后溶液的颜色比对

image.png

五

气相色谱-串联质谱法

（岛津 GC-MS -TQ8040 NX）

色谱条件

  • 色谱柱：SHIMADZU SH-Rxi-17Sil MS，30m×0.25mm, 0.25μm;

  • 进样口温度：250℃；

  • 升温程序：初始温度为60℃，保持1min；以10℃/min升温至160℃；再以2℃/min升温至230℃，最后以15℃/min升温至300℃，保持6min；

  • 载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；

  • 进样方式：不分流进样；

  • 恒压模式：146kPa；

  • 进样量：1μL。

质谱条件

  • 电离方式：电子轰击电离源（EI）；

  • 电离能量：70Ev；

  • 接口温度：250℃；

  • 离子源温度：250℃；

  • 监测方式：多反应检测模式（MRM）；

  • 溶剂延迟：10.0min。

GCMSMS监测目标物注意事项：

  • 内吸磷参考LCMSMS结果

  • 氟甲腈保留时间往后漂移1.6min左右（数据仅供参考，下同）

  • 氟虫腈亚砜保留时间往后漂移2min左右

  • 氟虫腈保留时间往后漂移2min左右

  • 氟虫腈砜保留时间往后漂移3.8min左右

  • 苯线磷保留时间往后漂移2min左右

  • 甲基硫环磷保留时间往后漂移2min左右

  • 除草醚保留时间往后漂移0.5min左右

以上保留时间漂移的目标物需要重新采集定位后再创建总MRM分析方法监测，或使用LCMSMS来监测保留时间漂移的目标物（不包含除草醚）。


六

高效液相色谱-串联质谱法

（岛津 LC-MS 8045）

色谱条件

  • 色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱(2.1 ×100 mm，2.6μm)

  • 流动相：

    A：0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）

    B：乙腈-0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）=95:5

  • 梯度：

时间

（min）

流速

（mL/min）

流动相A

（%）

流动相B

（%）

0

0.3

70

30

1

0.3

70

30

12

0.3

0

100

14

0.3

0

100

14.1

0.3

70

30

16

0.3

70

30

  • 流速: 0.3mL/min

  • 柱温: 40℃

  • 进样量: 2µL

质谱条件

  • 离子源: 电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描

  • 监测方式：多反应监测（Multiple Reaction Monitoring，MRM）

  • 离子源接口电压：4.5kV

  • 雾化气：氮气3.0L/min

  • 加热气：干燥空气10.0L/min

  • DL温度：250℃

  • 加热模块温度：400℃

  • 接口温度：300℃

  • 干燥气：N2 10L/min

LCMSMS监测目标物注意事项：

目标物

定量离子

CE电压

参考离子

CE电压

msec

保留时间（参考）

氟虫腈

434.90>81.00

15

434.90>249.80

30

5

7.341

氟甲腈

386.90>350.80

10

386.90>281.80

35

5

7.656

氟虫腈砜

450.90>281.80

30

450.90>243.80

66

5

8.093

氟虫腈亚砜

419.10>383.10

10

419.10>262.10

27

5

8.103

水胺硫磷

291.00>231.00

-15

291.00>121.00

-30

5

5.106

甲基硫环磷

228.00>168.1

-19

228.00>108.90

-33

5

0.886

  • 以上目标物中氟虫腈类化合物均为负离子模式采集，甲基硫环磷和水胺硫磷为正离子模式采集。

  • 由于分析化合物多，且存在正负离子模式同时采集，为提高仪器灵敏度可采用分段采集模式进行，分段采集可设置测定时间为各目标物保留时间前0.5min开始-目标物保留时间后0.5min结束。

  • 挥发油基质样品自动进样器托盘温度不宜过低，否则个别样品会出现分层，导致分析结果不准确，建议25℃为宜。

七

化合物出峰情况

蛇床子基质加标GCMSMS分析保留时间漂移的化合物出峰情况

image.png


蛇床子基质加标LCMSMS氟虫腈类和甲基硫环磷出峰情况

image.png

七

添加回收率


image.png



八

实验讨论



通过以上实验对比数据可以看出，SelectCore HLB-A 200mg/6mL小柱净化后的蛇床子样品溶液颜色较浅，减少了污染GCMSMS柱前端的风险。SelectCore HLB-B 200mg/6mL固相萃取柱对蛇床子中挥发油类成分祛除效果良好，减轻了由于基质中干扰物导致的LCMSMS上样品中部分目标物响应低的问题。这两款农残专用固相萃取柱，针对蛇床子中色素、挥发油类成分去除效果良好，搭配上述解决办法有效的提高了实验效率，也为蛇床子的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。



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