本品为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体。由于灵芝质地松泡，应用直接提取法时匀浆不易将样品完全均质，常见因提取不完全导致回收率偏低，因此针对这个品种我们推荐快速样品处理（QuEChERS）。

今天，我们来看看灵芝项目的前处理效果吧。

对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合1mL，置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用；

1 .2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1mL含1.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1mL含0.1μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份），置氮吹仪上，40°C 水浴浓缩至约0.6mL，分别加入混合对照品溶液10μL、20 μL、50 μL、100μL、150μL、200μL，加乙腈稀释至1mL，涡旋混匀，即得。

供试品溶液的制备

粉碎：

先将灵芝药材切成小块或片，使用粉碎机将其粉碎成粉末和絮状物的混合物，再将其转入开刀口的打粉机或破壁打粉机彻底粉碎，过3号筛即得。

提取：

取灵芝粉末（过三号筛）3g，精密称定，置50mL聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液15mL，涡旋使药粉充分浸润，放置30分钟，精密加入乙腈15mL，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5分钟，加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末(4: 1) 7.5g，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡（500次/分）3分钟，于冰浴中冷却10分钟，离心（每分钟4000转）5分钟，待净化。取灵芝粉末（过三号筛）3g，精密称定，置50mL聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液15mL，涡旋使药粉充分浸润，放置30分钟，精密加入乙腈15mL，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5分钟，加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末(4: 1)7.5g，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡（500次/分）3分钟，于冰浴中冷却10分钟，离心（每分钟4000转）5分钟，待净化。

附注：

由于灵芝粉末质地松泡，如果选择直接提取法可能匀浆不彻底，导致提取不完全；且第二次加入50mL乙腈后，样品液极易溢出离心管导致结果不准确；故选择QuEChERS法提取较为理想。如使用直接提取法需选择合适的样品量处理，避免出现上述问题。

净化

Q法净化管：Q-15PCSG01 SelectCore QuEChERS净化管 15mL, 900mg MgSO4, 300mg PSA, 300mg C18, 300mg Silica, 90mg GCB

净化：取上述提取液上清液9mL置Q-15PCSG01净化管中涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5分钟使净化完全，离心（每分钟4000转）5分钟，即得。

GC-MS/MS测定：精密吸取上清液5mL，置氮吹仪上于35℃水浴浓缩至约0.4mL，加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0mL，涡旋混匀，再加入0.3mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22μm尼龙针式过滤器，上机分析。

LC-MS/MS测定：精密吸取上清液5mL，置氮吹仪上于35℃水浴浓缩至约0.4mL，加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0mL，涡旋混匀，再加入0.3mL水，混匀，过0.22μm尼龙针式过滤器，上机分析。

气相色谱-串联质谱法

（岛津 GC-MS -TQ8040 NX）

• 色谱柱：SHIMADZU SH-Rxi-17Sil MS，30m×0.25mm, 0.25μm;

• 进样口温度：250℃；

• 升温程序：初始温度为60℃，保持1min；以10℃/min升温至160℃；再以2℃/min升温至230℃，最后以15℃/min升温至300℃，保持6min；

• 载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；

• 进样方式：不分流进样；

• 恒压模式：146kPa；

• 进样量：1μL。

• 电离方式：电子轰击电离源（EI）；

• 电离能量：70Ev；

• 接口温度：250℃；

• 离子源温度：250℃；

• 监测方式：多反应检测模式（MRM）；

• 溶剂延迟：10.0min。

高效液相色谱-串联质谱法

（岛津 LC-MS 8045）

• 色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱(2.1 ×100mm，2.6μm)

• 流动相：

  A：0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）

  B：乙腈-0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）=95:5

• 梯度：

• 流速: 0.3mL/min
  

• 柱温: 40℃

• 进样量: 2µL

• 离子源: 电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描

• 监测方式：多反应监测（Multiple Reaction Monitoring，MRM）

• 离子源接口电压：4.5kV

• 雾化气：氮气3.0L/min

• 加热气：干燥空气10.0L/min

• DL温度：250℃

• 加热模块温度：400℃

• 接口温度：300℃

• 干燥气：N₂ 10L/min

实验结果

添加回收率

实验讨论

 通过以上实验数据可以看出，灵芝使用QuEChERS法提取效果较为理想，搭配Q-15PCSG01净化管净化后的灵芝样品回收率较好，为灵芝的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。