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【应用分享】安神醒脑中药——石菖蒲的33种农残测定分析
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中药石菖蒲

石菖蒲，味辛、苦，性微温，具有开心窍、益心智、安心神、聪耳明目、化湿开胃的功效。石菖蒲，别名菖蒲、苦菖蒲、山菖蒲，为天南星科植物石菖蒲的干燥根茎，含有挥发油、糖分及有机酸类成分，其含有的挥发油成分容易造成GC-MS/MS分析中目标物保留时间漂移和干扰，其中杀虫脒干扰较为明显，另外这些干扰组分也会造成LC-MS/MS分析中目标物干扰大响应低等问题。纳谱分析推出的Q-15A06（含色素挥发油中药农残Q法）净化管，在不少中药中得以验证净化效果不错，如厚朴、木香、陈皮等。
今天，我们来看看石菖蒲项目的前处理效果吧。

适用范围

本方法参考中国药典2020版2341第五法中的QuEChERS法，适用于常规中药材的农残检测。

实验步骤

一 / 对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制
精密量取禁用农药混合对照溶液1 mL，置20 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用；
1.2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备
取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。
1.3 空白基质溶液的制备
取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。
1.4 基质混合对照溶液的制备
分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份），置氮吹仪上，40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL，分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL，加乙腈稀释至1 mL，涡旋混匀，即得。

二 / 供试品溶液的制备（QuEChERS法）

提取：取供试品粉末（过三号筛）3 g，精密称定，置50 mL聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液15 mL，涡旋使药粉充分浸润，放置30 min，精密加入乙腈15 mL，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡（500 次/min）5 min，加入QS-002盐包，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡（500次/min）3 min，于冰浴中冷却10 min，离心（4000 转/min）5 min，待净化。

三 / 净化

Q法净化管：Q-15A06 SelectCore QuEChERS净化管15mL，Pesticide Residue A06（含色素挥发油中药农残Q法）
净化：取上述石菖蒲提取液上清液9 mL置Q-15A06净化管中涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡（500 次/min）5 min使净化完全，离心（4000 转/min）5 min，即得。
GC-MS/MS测定：
基质加标配制：精密吸取上清液2.5 mL，置氮吹仪上于40 ℃水浴浓缩至约0.6 mL，加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0 mL，涡旋混匀，再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。
样品溶液配制：精密吸取上清液2.5 mL，置氮吹仪上于40 °C 水浴浓缩至1.0 mL，加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。
LC-MS/MS测定：
基质加标配制：精密吸取上清液2.5 mL，置氮吹仪上于40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL，加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0 mL，涡旋混匀，再加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。
样品溶液配制：精密吸取上清液2.5 mL，置氮吹仪上于40 °C 水浴浓缩至1.0 mL，加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

四 / 气相色谱-串联质谱法（岛津 GC-MS-TQ8040 NX）

4.1  色谱条件 

色谱柱：NanoChrom BP-50+MS, 30m×0.25mm×0.25μm
进样口温度：250 ℃
升温程序：初始温度为60 ℃，保持1 min；以10 ℃/min升温至160 ℃；再以2 ℃/min升温至230 ℃; 最后以15 ℃/min升温至300 ℃, 保持6 min；
载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；
进样方式：不分流进样；
恒压模式：146 kPa；
进样量：1 μL

4.2  质谱条件 

电离方式：电子轰击电离源（EI）；
电离能量：70 Ev；
接口温度：250 ℃；
离子源温度:250 ℃；
监测方式：多反应监测模式（MRM）；
溶剂延迟：10 min

五 / 高效液相色谱-串联质谱法（岛津 LC-MS 8045）

5.1  色谱条件

色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides, 2.6μm, 2.1×100mm

流动相：A: 0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵)

               B: 乙腈/0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵)=95:5

流速：0.3 mL/min

柱温：40 ℃

进样量：2 µL

梯度：

时间

(min)

流速

(mL/min)

流动相A
(%)
流动相B
(%)
0
0.3
70
30
1
0.3
70
30
12
0.3
0
100
14
0.3
0
100
14.1
0.3
70
30
16
0.3
70
30

5.2  质谱条件

离子源：电喷雾离子源(Electrospray ionization, ESI) 正离子扫描

监测方式：多反应监测(Multiple Reaction Monitoring, MRM)

接口电压：4.5 kV

雾化气：氮气3.0 L/min

加热气：干燥空气10.0 L/min

DL温度：250 ℃

加热模块温度：400 ℃

接口温度：300 ℃

干燥气：N2 10 L/min

六 / 注意事项

由于石菖蒲样品富含挥发油和色素成分，为保障实验结果的稳定和准确性也为了减轻样品中色素类成分对GC-MS/MS色谱柱的污染，故对样品浓度进行减半处理，减半后的样品与基质液浓度为0.5 g/mL（与直接提取法样品浓度一致）；

提取石菖蒲样品时加入盐包前将提取液与盐包都放入冰箱冷藏30 min，取出，立即加入盐包可有效防止脱水时放热，农残回收率更稳定；如遇杀虫脒回收率过低可取加入脱水盐包离心后的样品上清液5 mL过HLB固相萃取小柱，收集净化液，取净化液2.5 mL同上述样品液与基质加标液配制方法配制，LC-MS/MS分析筛查杀虫脒残留情况。

本实验中杀虫脒选择的气质质的离子对是参照2341第四法中的离子对信息，相对来说，干扰更小，灵敏度更高。

GC-MS/MS：杀虫脒监测离子对见下表 

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七 / 实验结果

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石菖蒲基质加标GC-MS/MS部分化合物分析结果谱图

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石菖蒲基质加标LC-MS/MS部分化合物分析结果谱图

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表1  石菖蒲中33种农药残留的测定添加回收结果（%）

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八 / 实验结论

通过以上实验数据可以看出，石菖蒲使用QuEChERS法处理搭配SelectCore QuEChERS Q-15A06净化管净化后各化合物出峰良好，搭配上述解决办法有效地提高了实验效率，也为石菖蒲的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。


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