对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合1mL，置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用；

1 .2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1mL含1.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1mL含0.1μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份），置氮吹仪上，40°C 水浴浓缩至约0.6mL，分别加入混合对照品溶液l0μL、20 μL、50 μL、100μL、150μL、200μL，加乙腈稀释至lmL，涡旋混匀，即得。

供试品溶液的制备

2.1 提取

精密称取5g样品（3号筛），加氯化钠1g，加入50mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50mL乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5mL，加乙腈定容至10mL，摇匀，置-20℃冷藏3h或家用冰箱冷藏过夜，取出趁冷离心1min(4000转/min)，分取所有上清液置离心管中，摇匀，待净化。

净化

• SPE柱：SelectCore HLB-C固相萃取柱 500mg/6mL

• 净化：取SelectCore HLB-C固相萃取柱 500mg/6mL小柱，加乙腈5mL活化，再取吴茱萸提取液2mL置已活化的SelectCore HLB-C固相萃取柱中，收集样品液，待所有样品液进入柱体填料后，取5mL乙腈洗脱，合并样品液与洗脱液，氮吹至2mL即得。

• GC/MS/MS测定：精密量取过固相萃取柱氮吹定容后的溶液1mL，氮吹至0.4mL加入混合对照溶液，乙腈定容至1mL，再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22μm尼龙针式过滤器，上机分析。

注意事项：样品洗脱定容后只有2mL，故需要配置6个浓度点标准曲线时可合并5次分别5根SelectCore HLB-C固相萃取柱 500mg/6mL小柱净化的样品液与洗脱液，40℃以下减压回收至5mL，转移至10mL容量瓶，再取适量乙腈冲洗减压回收瓶并入样品液，定容至10mL。如若做快速样品筛查时可直接将净化的样品液与洗脱液并入10mL已校准的刻度具塞试管中氮吹至2mL即得。

• SPE柱：SelectCore HLB固相萃取柱 500mg/6mL

• 净化：量取上述吴茱萸提取液3mL，过SelectCore HLB固相萃取柱500mg/6mL，收集全部净化液，混匀，即得。

• LC/MS/MS测定：精密量取过固相萃取柱后溶液1mL氮吹至0.4mL加入混合对照品液，乙腈定容至1mL，再加入0.3 mL水，混匀，过0.22μm尼龙针式过滤器，上机分析。

（用于吴茱萸LCMSMS中3-羟基克百威、特丁硫磷砜、甲拌磷砜）也可用于除甲胺磷、磺隆类、久效磷以外的化合物联合分析

取：SelectCore GCB/NH₂-A 固相萃取柱，加乙腈：甲苯（3:1）5mL活化，再取吴茱萸提取液2mL置已活化的SelectCore GCB/NH₂-A 固相萃取柱中，用乙腈：甲苯（3:1）15mL洗脱，收集样品液与洗脱液，减压回收至2mL即得。

注意事项：由于SelectCore GCB/NH₂-A 固相萃取柱净化洗脱液中含甲苯，减压回收时应尽量浓缩干一点，减少甲苯残留，甲苯残留量高可能导致个别化合物保留时间提前，配制样品液与基质加标和前加标液时应不加水，由于甲苯与水不溶，可能会导致分层而使分析结果不准确。

处理后溶液的颜色比对

气相色谱-串联质谱法

（岛津 GC-MS -TQ8040 NX）

• 色谱柱：SHIMADZU SH-Rxi-17Sil MS，30m×0.25mm, 0.25μm;

• 进样口温度：250℃；

• 升温程序：初始温度为60℃，保持1min；以10℃/min升温至160℃；再以2℃/min升温至230℃，最后以15℃/min升温至300℃，保持6min；

• 载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；

• 进样方式：不分流进样；

• 恒压模式：146kPa；

• 进样量：1μL。

• 电离方式：电子轰击电离源（EI）；

• 电离能量：70Ev；

• 接口温度：250℃；

• 离子源温度：250℃；

• 监测方式：多反应检测模式（MRM）；

• 溶剂延迟：10.0min。

• 甲基对硫磷定量离子：263.10>109.00  CE：13 

  参考离子：125.00>47.00  CE：10

• 地虫硫磷定量离子：245.90>137.00  CE:5

  参考离子：245.90>109.00  CE:15   

  保留时间(参考):16-19min与γ-666保留时间接近。

• 久效磷参考LCMSMS分析结果。

• 经过SelectCore HLB-C处理后的吴茱萸样品，GCMSMS分析化合物均无干扰，且氟虫腈类化合物保留时间均无漂移。

高效液相色谱-串联质谱法

（岛津 LC-MS 8045）

• 色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱(2.1 ×100 mm，2.6 μm)

• 流动相：

  A：0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）

  B：乙腈-0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）=95:5

• 梯度：

• 流速: 0.3mL/min
  

• 柱温: 40℃

• 进样量: 2µL

• 离子源: 电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描

• 监测方式：多反应监测（Multiple Reaction Monitoring，MRM）

• 离子源接口电压：4.5kV

• 雾化气：氮气3.0L/min

• 加热气：干燥空气10.0L/min

• DL温度：250℃

• 加热模块温度：400℃

• 接口温度：300℃

• 干燥气：N₂ 10L/min

吴茱萸基质中3-羟基克百威和甲拌磷砜响应较低，在样品出现阳性或线性达不到要求时采用上述补充净化办法来联合分析，补充净化办法净化的吴茱萸基质中3-羟基克百威和甲拌磷砜响应较为良好。

• 3-羟基克百威定量离子为：238.1>163.1

• 挥发油基质样品自动进样器托盘温度不宜过低，否则个别样品会出现分层，导致分析结果不准确，建议25℃为宜。

• 地虫硫磷参考GCMSMS分析结果LCMSMS可不分析此化合物

• 甲基异柳磷参考GCMSMS分析结果

• 蝇毒磷参考GCMSMS分析结果

• 杀虫脒参考GCMSMS分析结果

由于吴茱萸基质复杂，且目标物在吴茱萸基质中干扰情况为基质减弱，响应低，为提高仪器灵敏度，建议LCMSMS样品分析时采用分段采集的办法，分段采集设置时间段为各目标物保留时间前后0.5min即可。

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