固定相粒径是影响SEC分离能力的另一个关键点。

5 µm SEC色谱柱通常用于治疗性蛋白药物常规分析（聚集体和单体分离）。 

图7展示BioCore SEC-300色谱柱和一款著名SEC色谱柱分离抗体的对比：两支色谱柱均填充5 µm硅胶颗粒，柱规格为7.8×300 mm。相同实验条件下，聚集体和单体分离度相当；BioCore SEC-300色谱柱可以实现单体和低分子量组分更好的分离。

现代SEC分析，通常需要快速分离来获得高通量。填充较小颗粒的短柱可以提供较短分离时间所需要的分辨率。如图9所示，使用常规SEC 5 µm, 4.6×300 mm色谱柱，在13 min内，实现一个单抗样品的聚集体分析；相同实验条件下，使用装填1.8 µm粒径填料的色谱柱（4.6×150 mm），分析时间可以缩短一半。同时，填充较小粒径的短柱可以提供更窄的峰宽和更好的分辨率：短柱上聚集体峰（3）与单体峰（4）之间的分离度为1.98，高于常规色谱柱获得的峰分离度：1.68。

图9 BioCore SEC-300 5 µm和1.8 µm两款不同粒径色谱柱分离单抗的对比

要点6: 耐受性

色谱柱的寿命是选择HPLC色谱柱需要考虑的一个重要因素。

色谱柱质量、色谱条件、样品和液相仪器系统等都会影响色谱柱寿命。

与其他类型的固定相相比，由于孔径较大，SEC填料会脆弱一些：在使用过程中需要特别小心，例如避免突然的压力波动或超压，充分净化样品等。 

BioCore SEC色谱柱使用高孔容、高机械强度的单分散硅胶颗粒，以及成熟的装填工艺，具备良好稳定性。

图10是基于BioCore SEC-300, 3µm, 7.8×150mm色谱柱进行的实际耐受性测试。无需使用保护柱，该分析柱持续进样800针。根据结果如表中所示，抗体主峰洗脱时间非常稳定，RSD值为0.26%。同时，聚集体峰面积和单体峰面积RSD值分别为2.49%和0.03%。

图10 BioCore SEC-300, 3µm, 7.8 × 150mm色谱柱耐受性测试

该结果表明，在治疗性蛋白药物聚集体分析中，BioCore SEC-300色谱柱具备良好耐用性。为最大限度地延长色谱柱使用寿命，建议使用保护柱。