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【应用分享】中药款冬花的33种农残测定分析

image.png

图

款冬花（图片源于网络，侵删）

款冬花为菊科植物款冬的干燥花蕾，含有较多的色素类、挥发油类成分，这些成分会造成农残分析中个别目标物干扰较大、无法准确定性等问题，其中地虫硫磷干扰较为明显。针对花类含有色素和挥发油的项目，我们推荐固相萃取法二和固相萃取法三结合净化，效果较好。

今天，我们来看看款冬花项目的前处理效果吧。

适用范围

本方法参考中国药典2020版2341 第五法中的固相萃取法二和固相萃取法三，适用于含色素、挥发油类成分的中药材的农残检测。

实验步骤

一 / 对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合1 mL，置20 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用；

1.2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份），置氮吹仪上，40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL，分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL，加乙腈稀释至1 mL，涡旋混匀，即得。

二 / 供试品溶液的制备（直接提取法）

提取：精密称取5 g样品（3号筛），加氯化钠1 g，加入50 mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50 mL乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5 mL，加乙腈定容至10 mL，摇匀，待净化。

三 / 净化


GC-MS/MS样品净化：

SPE柱：SelectCore GCB/NH2-II 固相萃取柱500mg/500mg/6mL

净化：取SelectCore GCB/NH2-II 固相萃取柱用乙腈：甲苯（3:1）10 mL活化，量取上述款冬花提取液2 mL，置已活化的SelectCore GCB/NH2-II 固相萃取柱中，用乙腈：甲苯（3:1）20 mL洗脱，收集全部样品液与洗脱液，40 ℃水浴减压回收至2 mL，即得。

GC-MS/MS测定：

基质加标配制：精密量取上述减压回收后的样品溶液1 mL，氮吹至0.6 mL加入混合对照溶液，乙腈定容至1 mL，再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

样品溶液配制：精密量取上述减压回收后的样品溶液1 mL加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。


LC-MS/MS样品净化：

SPE柱：SelectCore HLB 固相萃取柱200mg/6mL

净化：量取上述款冬花提取液3 mL，过SelectCore HLB固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得。

LC-MS/MS测定：

基质加标配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL氮吹至0.6 mL加入混合对照品液，乙腈定容至1 mL，再加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

样品溶液配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

四 / 气相色谱-串联质谱法（岛津GC-MS-TQ8040 NX）

4.1  色谱条件

色谱柱：NanoChrom BP-50+MS, 30m×0.25mm×0.25μm；

进样口温度：250 ℃

升温程序：初始温度为60 ℃，保持1 min；       

                  以10 ℃/min升温至160 ℃；

                  再以2 ℃/min升温至230 ℃; 

                  最后以15 ℃/min升温至300 ℃, 保持6 min；

载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；

进样方式：不分流进样；

恒压模式：146 kPa；

进样量：   1 μL

4.2  质谱条件 

电离方式：电子轰击电离源（EI）；

电离能量：70 Ev；

接口温度：250 ℃；

离子源温度：250 ℃；

监测方式：多反应监测模式（MRM）；

溶剂延迟：10.0 min

五 / 高效液相色谱-串联质谱法（岛津LC-MS 8045）

5.1  色谱条件

色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides 2.6μm,  2.1×100mm;

流动相：

        A：0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)

        B：乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)=95:5

流速：0.3 mL/min

柱温：40 ℃

进样量：2 µL

梯度：

时间

(min)

流速

(mL/min)

流动相A
(%)
流动相B
(%)
0
0.3
70
30
1
0.3
70
30
12
0.3
0
100
14
0.3
0
100
14.1
0.3
70
30
16
0.3
70
30


5.2  质谱条件

离子源：电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描

监测方式：多反应监测模式（MRM）

离子源接口电压：4.5 kV

雾化气：氮气3.0 L/min

加热气：干燥空气10.0 L/min

DL温度：250 ℃

加热模块温度：400 ℃

接口温度：300 ℃

干燥气：N2 10 L/min

六 / 注意事项

由于款冬花基质复杂，在LC-MS/MS分析中地虫硫磷存在较大干扰无法准确判定，故选用GC-MS/MS来检测款冬花中地虫硫磷的残留结果，GC-MS/MS检测地虫硫磷条件如下表所示。

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七 / 实验结果

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款冬花基质加标GC-MS/MS部分化合物分析结果谱图

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表1  款冬花中33种农药残留的测定添加回收结果（%）

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八 / 实验结论

通过以上实验数据可以看出，款冬花使用SelectCore GCB/NH2-II 固相萃取柱处理对其色素类成分吸附良好，有效地避免了样品中色素成分对GC-MS/MS柱前端的污染；使用SelectCore HLB 固相萃取柱处理的款冬花LC-MS/MS样品液中干扰较少，搭配上述解决办法有效地解决了款冬花农残检测中地虫硫磷存在的问题，提高了实验效率，为款冬花的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。

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