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适用范围
本方法参考中国药典2020版2341第五法中的QuEChERS法和固相萃取法三,适用于含色素、挥发油类成分的中药材的农残检测。
实验步骤
一 / 对照品溶液的制备
1.1 混合对照品配制
精密量取禁用农药混合1 mL,置20 mL量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀,备用;
1.2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备
取磷酸三苯酯对照品适量,精密称定,加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液,即得。精密量取适量,加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。
1.3 空白基质溶液的制备
取空白基质样品,同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。
1.4 基质混合对照溶液的制备
分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份),置氮吹仪上,40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL,分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL,加乙腈稀释至1 mL,涡旋混匀,即得。
二 / 供试品溶液的制备
2.1 GC-MS/MS样品提取(直接提取法)
精密称取5 g样品(3号筛),加氯化钠1 g,加入50 mL乙腈,匀浆处理2分钟,离心后分取上清液,残渣再加50 mL乙腈,匀浆处理1分钟,离心后,合并两次提取上清液,减压浓缩至3~5 mL,加乙腈定容至10 mL,摇匀,待净化。
2.2 LC-MS/MS样品提取(QuEChERS法)
取供试品粉末(过三号筛)3 g,精密称定,置50 mL聚苯乙烯具塞离心管中,加入1%冰醋酸溶液15 mL,涡旋使药粉充分浸润,放置30分钟,精密加入乙腈15 mL,涡旋使混匀,置振荡器上剧烈振荡(500次/分)5分钟,加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末(4: 1)7.5 g,立即摇散,再置振荡器上剧烈振荡(500次/分)3分钟,于冰浴中冷却10分钟,离心(每分钟4000转)5分钟,待净化。
三 / 净化
GC-MS/MS样品净化:
SPE柱:SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱
净化:取SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱用乙腈:甲苯(3:1)10 mL活化,量取上述GC-MS/MS样品提取项下的薄荷提取液2 mL,置已活化的SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱中,用乙腈:甲苯(3:1)20 mL洗脱,收集全部样品液与洗脱液,40 ℃水浴减压回收至2 mL,即得。
GC-MS/MS测定:
基质加标配制:精密量取上述减压回收后的样品溶液1 mL,氮吹至约0.6 mL加入混合对照溶液,乙腈定容至1 mL,再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。
样品溶液配制:精密量取上述减压回收后的样品溶液1 mL加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。
LC-MS/MS样品净化:
Q法净化管:SelectCore QuEChERS Q-15A06 SelectCore QuEChERS 净化管 15mL, Pesticide Residue A06(含色素挥发油中药农残Q法)
净化:量取上述LC-MS/MS样品提取项下的上清液9 mL置Q-15A06净化管中涡旋使充分混匀,置振荡器上剧烈振荡(500次/分)5分钟使净化完全,离心(每分钟4000转)5分钟,即得。
LC-MS/MS测定:
基质加标配制:精密吸取上清液2.5 mL,置氮吹仪上于40 °C水浴浓缩至约0.6 mL,加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0 mL,涡旋混匀,再加入0.3 mL水,混匀,过0.22 μm针式尼龙滤头,上机分析。
样品溶液配制:精密吸取上清液2.5 mL,置氮吹仪上于40 °C 水浴浓缩至1.0 mL,加入0.3 mL水,混匀,过0.22 μm针式尼龙滤头,上机分析。
四 / 气相色谱-串联质谱法(岛津GC-MS-TQ8040 NX)
4.1 色谱条件
色谱柱:NanoChrom BP-50+MS,30m×0.25mm×0.25μm;
进样口温度:250 ℃
升温程序:初始温度为60 ℃,保持1 min;
以10 ℃/min升温至160 ℃;
再以2 ℃/min升温至230 ℃;
最后以15 ℃/min升温至300 ℃, 保持6 min;
载气:高纯氦气(纯度>99.999%);
进样方式:不分流进样;
恒压模式:146 kPa;
进样量: 1 μL
4.2 质谱条件
电离方式:电子轰击电离源(EI);
电离能量:70 Ev;
接口温度:250 ℃;
离子源温度:250 ℃;
监测方式:多反应监测模式(MRM);
溶剂延迟:10.0 min
五 / 高效液相色谱-串联质谱法(岛津LC-MS 8045)
5.1 色谱条件
色谱柱:ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱2.6μm, 2.1×100mm;
流动相:
A:0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵)
B:乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵)=95:5
流速:0.3 mL/min
柱温:40 ℃
进样量:2 µL
梯度:
时间 (min) | 流速 (mL/min) | ||
5.2 质谱条件
离子源:电喷雾离子源(Electrospray ionization,ESI)正离子扫描
监测方式:多反应监测模式(MRM)
离子源接口电压:4.5 kV
雾化气:氮气3.0 L/min
加热气:干燥空气10.0 L/min
DL温度:250 ℃
加热模块温度:400 ℃
接口温度:300 ℃
干燥气:N2 10 L/min
六 / 注意事项
GC-MS/MS:久效磷参考LC-MS/MS分析结果。
LC-MS/MS:由于样品中挥发油类成分和色素类成分较多,这些成分容易造成目标物响应变低,故对样品浓度进行减半处理,减半后的样品与基质液浓度为0.5 g/mL(与直接提取法样品浓度一致);甲拌磷参考GC-MS/MS分析结果;甲拌磷砜参考GC-MS/MS分析结果(检测条件见下表)由于使用33种农残混标定位甲拌磷砜在GC-MS/MS上出峰时间时使用以下4组离子对在甲拌磷砜相邻时间段内有多个化合物均有响应,为避免定位不准确务必使用甲拌磷砜单标对照品来定位;水胺硫磷参考GC-MS/MS分析结果;杀虫脒参考GC-MS/MS结果。
七 / 实验结果
薄荷基质加标GC-MS/MS部分化合物分析结果谱图
薄荷基质加标LC-MS/MS部分化合物分析结果谱图
表1 薄荷中33种农药残留的测定添加回收结果(%)
八 / 实验结论
通过以上实验数据可以看出,薄荷使用SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱处理对其色素类和挥发油类成分吸附良好,有效地减轻了样品中色素成分对GC-MS/MS柱前端的污染,基质加标中各目标物保留时间稳定;使用SelectCore QuEChERS Q-15A06净化管处理的薄荷LC-MS/MS基质加标液中化合物出峰良好,有效地减轻了由于样品中挥发油导致的目标物响应低的问题;搭配上述解决办法有效地解决了薄荷农残检测中存在的问题,提高了实验效率,为薄荷的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。