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【应用分享】中药枳实的33种农残测定分析
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枳实（图片源于网络，侵删）


枳实为芸香科植物酸橙及其栽培变种或甜橙的干燥幼果，含有色素类、挥发油类成分，这些成分会造成农残分析中的GC-MS/MS检测目标物干扰较大、保留时间飘移等问题。针对果实类含有色素和挥发油的项目，我们推荐GC-MS/MS和LC-MS/MS用固相萃取法二分开净化，效果较好。

今天，我们来看看枳实项目的前处理效果吧。

适

用

范

围

Scope of application

本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法二，适用于含色素类、油脂性成分的中药材的农残检测。

实

验

步

骤

Experimental steps

一 / 对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合1 mL，置20 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用；

1.2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份），置氮吹仪上，40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL，分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL，加乙腈稀释至1 mL，涡旋混匀，即得。

二 / 供试品溶液的制备

2.1 粉碎

取枳实药材用工具将其压扁后取铡刀将压扁后的枳实药材切成小碎块，置粉碎机中少量多次粉碎，直至完全通过3号筛。

2.2 提取（直接提取法）

精密称取5 g样品（3号筛），加氯化钠1 g，加入50 mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50 mL乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5 mL左右，加乙腈定容至10 mL，摇匀，置冰箱冷藏2小时后，取出，趁冷离心1分钟，取所有上清液置新的离心管中，放置至室温后净化。

三 / 净化


GC-MS/MS样品净化：

SPE柱：SelectCore HLB-A中药农残专用柱200mg/6mL

净化：量取上述枳实提取液5 mL，过SelectCore HLB-A中药农残专用柱200 mg/6mL，收集全部净化液，混匀，即得。

GC-MS/MS测定：

基质加标配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL，氮吹至0.6 mL加入混合对照溶液，乙腈定容至1 mL，再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

样品溶液配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。


LC-MS/MS样品净化：

SPE柱：SelectCore HLB 固相萃取柱200mg/6mL

净化：量取上述枳实提取液3 mL，过SelectCore HLB固相萃取柱200 mg/6mL，收集全部净化液，混匀，即得。

LC-MS/MS测定：

基质加标配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL氮吹至0.6 mL加入混合对照品液，乙腈定容至1 mL，再加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

样品溶液配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

四 / 气相色谱-串联质谱法（岛津GC-MS-TQ8040 NX）

4.1  色谱条件

色谱柱：NanoChrom BP-50+MS,30m×0.25mm×0.25μm；

进样口温度：250 ℃

升温程序：初始温度为60 ℃，保持1 min；       

                  以10 ℃/min升温至160 ℃；

                  再以2 ℃/min升温至230 ℃; 

                  最后以15 ℃/min升温至300 ℃, 保持6 min；

载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；

进样方式：不分流进样；

恒压模式：146 kPa；

进样量：   1 μL

4.2  质谱条件 

电离方式：电子轰击电离源（EI）；

电离能量：70 Ev；

接口温度：250 ℃；

离子源温度：250 ℃；

监测方式：多反应监测模式（MRM）；

溶剂延迟：10.0 min

五 / 高效液相色谱-串联质谱法（岛津LC-MS 8045）

5.1  色谱条件

色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides 中药农残专用柱2.6μm,  2.1×100mm；

流动相：

        A：0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)

        B：乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)=95:5

流速：0.3 mL/min

柱温：40 ℃

进样量：2 µL

梯度：

时间

(min)

流速

(mL/min)

流动相A
(%)
流动相B
(%)
0
0.3
70
30
1
0.3
70
30
12
0.3
0
100
14
0.3
0
100
14.1
0.3
70
30
16
0.3
70
30


5.2  质谱条件

离子源：电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描

监测方式：多反应监测模式（MRM）

离子源接口电压：4.5 kV

雾化气：氮气3.0 L/min

加热气：干燥空气10.0 L/min

DL温度：250 ℃

加热模块温度：400 ℃

接口温度：300 ℃

干燥气：N2 10 L/min

六 / 注意事项

枳实药材质地坚实，直接粉碎效果不好且极易损坏粉碎机。

GC-MS/MS：如遇滴滴滴类化合物回收率偏低，可将上柱净化量增加到6 mL。

LC-MS/MS：由于样品含有挥发油，在配制待测溶液时加入水后可使样品液变浑浊，过0.22 μm针式尼龙滤头后应观测待测溶液是否澄清，仍浑浊可再过一次0.22 μm针式尼龙滤头即可解决；自动进样器托盘温度不宜过低，避免待测溶液出现分层导致分析结果不准确。

七 / 实验结果

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枳实基质加标GC-MS/MS部分化合物分析结果图谱

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枳实基质加标LC-MS/MS部分化合物分析结果图谱

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表1  枳实中33种农药残留的测定添加回收结果（%）

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八 / 实验结论

通过以上实验数据可以看出，枳实使用SelectCore HLB-A 固相萃取柱处理对其挥发油类成分吸附良好，有效地减轻了样品中挥发油成分对GC-MS/MS中目标物的干扰；使用SelectCore HLB 固相萃取柱对其干扰成分吸附良好，LC-MS/MS基质加标液中化合物出峰良好，搭配上述解决办法有效地解决了枳实农残分析中存在的问题，提高了实验效率，为枳实的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。

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