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服务与支持

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【应用分享】中药当归的33种农残测定分析

当归为伞形科植物当归的干燥根,含有较多挥发油类成分。

今天,我们使用QuEChERS法看下当归项目的前处理效果吧。

适用范围

本方法参考中国药典2020版2341第五法中的QuEChERS法,适用于常规中药材的农残检测。

实验步骤

 / 对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合1 mL,置20 mL量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀,备用;

1.2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量,精密称定,加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液,即得。精密量取适量,加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取空白基质样品,同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份),置氮吹仪上,40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL,分别加入混合对照品溶液10 μL、20  μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL,加乙腈稀释至1 mL,涡旋混匀,即得。

二 / 供试品溶液的制备

提取(QuEChERS法):

精密称取供试品粉末(过3号筛)3 g,置50 mL聚苯乙烯具塞离心管中,加入1%冰醋酸溶液15 mL,涡旋使药粉充分浸润,放置30分钟,精密加入乙腈15 mL,涡旋使混匀,置振荡器上剧烈振荡(500次/分)5分钟,加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末(4: 1)7.5 g,立即摇散,再置振荡器上剧烈振荡(500次/分)3分钟,于冰浴中冷却10分钟,离心(每分钟4000转)5分钟,待净化。

三 / 净化

Q法净化管:Q-15PCSG01 SelectCore QuEChERS净化管 15mL, 900mg MgSO4, 300mg PSA, 300mg C18, 300mg Silica, 90mg GCB

净化:上述提取液上清液9 mL置Q-15PCSG01净化管中涡旋使充分混匀,振荡器上剧烈振荡(500次/分)5分钟使净化完全,离心(每分钟4000转)5分钟,即得。


GC-MS/MS测定:

基质加标配制:精密吸取上清液5 mL,置氮吹仪上于40 °C水浴浓缩至约0.6 mL,加入混合对照品液再加乙腈稀释至1. 0 mL,涡旋混匀,再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22 μm针式尼龙滤头,上机分析。

样品溶液配制:精密吸取上清液5 mL,置氮吹仪上于40 °C水浴浓缩至1.0 mL,加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22 μm针式尼龙滤头,上机分析。

LC-MS/MS测定:

基质加标配制:精密吸取上清液5 mL,置氮吹仪上于40 °C水浴浓缩至约0.6 mL,加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0 mL,涡旋混匀,再加入0.3 mL水,混匀,过0.22 μm针式尼龙滤头,上机分析。

样品溶液配制:精密吸取上清液5 mL,置氮吹仪上于40 °C水浴浓缩至1.0 mL,加入0.3 mL水,混匀,过0.22 μm针式尼龙滤头,上机分析。

四 / 气相色谱-串联质谱法(岛津GC-MS-TQ8040 NX)

4.1  色谱条件

色谱柱:NanoChrom BP-50+MS,30m×0.25mm×0.25μm;

进样口温度:250 ℃

升温程序:初始温度为60 ℃,保持1 min;       

                  以10 ℃/min升温至160 ℃;

                  再以2 ℃/min升温至230 ℃; 

                  最后以15 ℃/min升温至300 ℃, 保持6 min;

载气:高纯氦气(纯度>99.999%);

进样方式:不分流进样;

恒压模式:146 kPa;

进样量:   1 μL

4.2  质谱条件 

电离方式:电子轰击电离源(EI);

电离能量:70 Ev;

接口温度:250 ℃;

离子源温度:250 ℃;

监测方式:多反应监测模式(MRM);

溶剂延迟:10.0 min

五 / 高效液相色谱-串联质谱法(岛津LC-MS 8045)

5.1  色谱条件

色谱柱:ChromCore C18-MS Pesticides 2.6μm,  2.1×100mm;

流动相:

    A:0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)

    B:乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)=95:5

流速:0.3 mL/min

柱温:40 ℃

进样量:2 µL

梯度:

时间

(min)

流速

(mL/min)

流动相A
(%)
流动相B
(%)
0
0.3
70
30
1
0.3
70
30
12
0.3
0
100
14
0.3
0
100
14.1
0.3
70
30
16
0.3
70
30


5.2  质谱条件

离子源:电喷雾离子源(Electrospray ionization,ESI)正离子扫描

监测方式:多反应监测模式(MRM)

离子源接口电压:4.5 kV

雾化气:氮气3.0 L/min

加热气:干燥空气10.0 L/min

DL温度:250 ℃

加热模块温度:400 ℃

接口温度:300 ℃

干燥气:N2 10 L/min

六 / 注意事项

GC-MS/MS:内吸磷参考LC-MS/MS检测结果。

LC-MS/MS:由于样品含有挥发油,在配制待测溶液时加入水后可使样品液变浑浊,过0.22 μm针式尼龙滤头后应观测待测溶液是否澄清,仍然浑浊可再过一次0.22 μm针式尼龙滤头即可解决;自动进样器托盘温度不宜过低,避免待测溶液出现分层导致分析结果不准确。

七 / 实验结果

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表1  当归中33种农药残留的测定添加回收结果(%)

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八 / 实验结论

通过以上实验数据可以看出,当归使用QuEChERS法处理各化合物出峰良好。搭配上述解决办法有效地提高了实验效率,也为当归的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。