1.保留时间的重现性

温度、流动相组成、pH、离子强度等的微小变化都会引起保留时间的改变。

在色谱分析中最重要的是分离选择性，保留时间的重现性则是可简单通过用峰面积定量代替峰高定量来消除其对分析结果的影响。

2.保留时间漂移

一般来说，保留时间漂移的原因有以下几点：

1. 柱平衡不够：10-20柱体积流动相平衡是必须的。如有三乙胺等添加剂加入，平衡时间需加长。

2. 固定相流失：1) 在酸性条件下键合相碳链水解断裂流失；2)碱性条件下硅胶基质溶解导致在基质上键合固定相流失；3）p H2-8下，上述两种因素导致的流失仍会缓慢发生。（多位键合比单点键合好，长链比短链键合牢固，用于封尾的键合相易流失；C18链的稳定性比CN基链大三个数量级，一个是3个月会有明显流失，一个是1小时；用有机相洗柱子也会加快流动相的流失。）

3. 柱污染：污染物作为固定相的一部分起保留作用，随着污染程度的逐步增加，保留时间发生趋向性的变化。

4. 流动相组成变化: 如甲醇等挥发引起保留时间逐步变大。

5. 相塌陷：纯水条件下，C18柱会发生固定相塌陷，引起保留时间逐步变小甚至失去保留能力。

3.柱与柱之间的重现性

• 同一批填料生产出的不同柱子，装柱密度或柱体积的不同引起保留时间不一致。

• 同样尺寸规格柱子，填料装得越结实，柱体积越小，保留时间越快。正常情况只有百分之几的差别。

• 平衡程度、老化程度、使用历史及污染程度的不一样都会导致两根同品牌同批次色谱柱之间的保留时间不一致。

4.批与批之间的重现性

批次差异大多是由于不同批次填料之间的差异性导致，主要是表面键合度（可用载碳量指标）和羟基活性方面的差异。可调整方法提高方法的适应性，或者让厂商备存足够的同批次的适应方法的填料。