开发方法，不可避免地要对方法进行评价。如何评价呢？

重复性与重现性的区别与联系？

何时必须进行重现性实验？

重复性实验和重现性实验的先后顺序？

HPLC分析保留时间重现性不佳的原因？

1 检查进样量及进样操作

进样量不符合要求或者进样时操作失误，都可能导致色谱峰面积重现性差。如果是使用手动进样器且方法要求进样量小于定量环体积，必须使用合格的小体积进样针完成进样，且尽可能控制每次进样体积一样。如果是使用自动进样器，需检查进样系统是否存在气泡、样品瓶是否装得过满、是否存在进样针座堵塞或漏液等。

2 查看峰型

如果峰型差，比如拖尾或者前沿、峰顶出现分叉等，将会影响工作站积分重复性。

3 核查样品浓度 

样品尤其是挥发性样品，可能由于放置时间过长而引起样品浓度变化，导致峰面积重现性差。

4 核查样品稳定性

有的化合物可能室温下不稳定，再新配溶液进样试试看。

5 查看保留时间

保留时间不稳定对峰面积重复性有很大的影响（一般保留时间越长峰面积会越小），因此所有可能影响保留时间重现性的原因都有可能导致峰面积重现性差。在此之前我们已详细分析过这些因素，主要包括：流动相流速不稳定、流动相组成变化、色谱柱老化、柱温变化等。

6 检查流动相

样品与流动相起始比例不兼容，有的样品组分在梯度起始流动相里可能析出，请调整合适的流动相。

7 检查色谱柱

色谱柱污染了，请使用更强的洗脱溶剂冲洗色谱柱。

8 核查检测器参数

应核查检测器的各项参数：比如UV检测器的温度（若设置温度）是否稳定，CAD检测器的载气流速、气体压力是否正常等。

GC重现性不好，可能原因是？

GC定量不重复原因一般是两大类：

GC定量不重复检查方案如下：

1 进样技术检查：

进样技术不佳是造成色谱峰不重复的最可能原因。它通常表现为峰高、峰面积忽大忽小，峰高、峰面积大小变化无规则。提高进样重复性的关键，在于始终保持进样操作个大步骤的重复性，这包括取样操作，取样到进样期间的空闲时间，进针快慢及拔出注射器的早晚，通常操作人员在经过较多地进样重复性训练之后，可以达到所需的要求。

2 注射器的检查：

操作人员进样技术提高后，色谱峰灵敏度仍然无显著改观，需认真检查注射器本身是否有堵塞或泄露现象，必要时更换一个好的注射器重新进样实验。 

3 样品均匀性检查：

制备的样品在样品瓶中混合不均匀或每次取样时注射器对样品产生玷污以及样品挥发等都会影响出峰灵敏度的重复性（不能漏过此项检查）。定量不重复由上述三种原因引起的可能性很大，而且都和进样操作密切相关，因此可一起进行检查。只有在上述检查后无异常发现时才转入接下的检查步骤。

4 伴随现象观察：

在检查灵敏度情况的同时注意是否有下述异常现象发生，包括基线是否稳定，出峰保留时间是否重复，峰形是否有畸变三种情况，如果出现其中一种，应先按所出现的故障进行排除，再重新进行定量重复性测试。没发现伴随异常现象时，应转入下面的检查步骤。

5 进样口污染及系统漏气检查：

关断桥电流（对TCD而言）后，取下进样口隔垫，观察进样口内是否有污染或堆积物，如果有，需进行清除和清洗。清洗完毕装上隔垫后需对气路系统进行试漏：堵住检测器出口，观察转子流量计中的转子应能下降为零，否则说明气路有泄漏。在确信进样口无严重污染及气路无漏气的情况下进行（6）的检查。

6 特种原因检查：

对有些检测器而言，某些原因所伴随的故障异常不太明显，易被忽略掉，因此应按照此项进行检查，以便不漏过可能发生故障的因素。

• 对FID来说，极化电压较低及氢气流量不稳，有可能导致灵敏度变化而无其它明显异常。对此可首先测试极化电压大小以确定极化电压是否太低，过低的极化电压以及无极化电压都属于故障。正常时极化电压为150~300V。如极化电压正常，则应转入放大器的灵敏档观察氢焰基始电流的变动情况，在氢气流不稳定时基流应能呈现出摆动和漂移现象。

• 对于任何检测器，样品中的某些组分在检测器中逐渐冷凝并累积，将会影响下一次进样后的灵敏度，情况严重时还会造成气路堵塞。通常的解决方法也是适当提高检测器的温度，以减少或消除样品室的冷凝现象。

出现样品峰面积重现性不好怎么办？ 

1 进样口部分：

• 进样技术不佳是造成色谱峰不重复的最可能原因。它通常表现为峰高、峰面积忽大忽小，峰高、峰面积大小变化无规则。提高进样重复性的关键，在于始终保持进样操作个大步骤的重复性，这包括取样操作，取样到进样期间的空闲时间，进针快慢及拔出注射器的早晚，通常操作人员在经过较多地进样重复性训练之后，可以达到所需的要求。

2 色谱柱部分：

• 首先应确认色谱柱处于良好的工作状态，譬如老化是否充分，检查柱与进样口及检测器两端的插入长度是否符合要求，柱头处端面是否整齐，必要时切掉几公分。检查柱两端的石墨垫密封情况是否良好，必要时更换之。

3 检测器部分：

• 取下收集极，拆下喷嘴检查是否有堵塞情况，必要时进行疏通。检查氢气和空气的管路是否通畅。观察收集极表面是否有生锈或者积炭的情况，进行清洁处理。

• 进行完上述简单处理后开机用标样进行试验，不进样品，空走一遍做一针空白，保留谱图。单进一针用于溶解样品的溶剂，保留谱图。