HPLC色谱保养技巧

仪器：高效液相色谱HPLC

组件：流动相溶剂瓶→高压泵→进样器→色谱柱→检测器→废液

保养：

具体如下：

01.流动相溶剂瓶

溶剂瓶是流动相的起点，通常是盛放水相溶液或是有机相溶液。

1、水相溶液，对于水相溶液来说，首要的问题是防止污染。对于溶剂瓶我们要做的非常重要的工作就是勤换流动相，常换常新。

2、有机相溶液，对于有机相溶液，可以不用担心细菌繁殖的问题。但是有机相容易发生聚合，特别是乙腈在适宜的光照条件下极易发生聚合，瓶子里就会出现一些絮状的聚合沉淀物。为了防止聚合过程的发生，装乙腈时要用棕色的溶剂瓶，避免阳光直射，更换乙腈时应当弃去瓶底剩余的溶液。

3、清洗过滤，溶剂瓶里的过滤头，其作用是为了防止溶液瓶中的颗粒杂质进入到仪器的流路系统中，它的材质通常分为玻璃烧结石英和不锈钢，如果不慎堵塞会造成流动相吸液不畅，因此必须进行清洗，玻璃材质的通常是用稀硝酸泡，而不锈钢材质的可以直接进行超声清洗。

02.高压泵

泵是液相色谱的核心，泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中，并要在高压下保持流量和压力的稳定。状态正常的高压泵是液相色谱准确分析的基础，所以平日一定要重视对泵的维护。

1、泵压力波动，很多情况下，泵的问题反映在压力上，压力波动又是常见的一类问题。通常我们可以通过重新清洗流路和再次脱气流动相加以解决。

2、过滤白头保养，在泵的维护里还有一项常做的工作就是更换清洗阀上的过滤白头，通常判断的标准是纯水以5mL/min流速清洗的时候，如果压力超过1MPa则考虑更换。

03.进样器

进样器分手动和自动两大类，虽然两者工作模式不同，但使用的要点是基本一致的。

1、防止交叉污染，自动进样器常见的问题是交叉污染，交叉污染产生的原因很直接，样品残留在进样针内外表面，并随下一次进样进入色谱系统。要解决交叉污染，主要靠清洗。

2、精细操作，手动进样器的操作要点大致相同，应使用液相色谱LC专用进样针，进样时插针应插到底，不使用时将针头留在进样器内，使用前后都要及时清洗。

04.色谱柱

1.所使用的流动相均应为HPLC级或相当于该级别的，在配置过程中所有非HPLC级的试剂或溶液均经0.22um薄膜过滤，而且流动相使用前都经过超声仪超声脱气后才使用。

2.所使用的水必须是经过蒸馏纯化后再经过0.22um水膜过滤后使用，所有试液均现用现配。并且在进样的样品都必须经过0.22um薄膜针筒过滤后进样。

3.所使用到的最大流速为1.0mL/min，所以流速提升过程应是梯度提升，不存在流速的突升突降。

4.仪器检测完，需要用流动相梯度洗脱色谱柱1小时以上。

05.检测器

1、光源部分

检测器中非常重要的部件是光源，光源对发射能量有要求，一旦能量衰减到一定程度，就会出现基线噪声变大，灵敏度降低等一系列影响使用的问题，因此光源是一个消耗品。通常紫外灯的寿命是2000h，当到达这个时限的时候，我们就要特别关注灯的能量状况，可以通过仪器维护软件中自带的“灯能量测试”功能来判断，测试的结果会分别评估低、中、高三个波长段的能量，一旦某个波长段的测试结果显示失败，就表示需要更换灯。

2、检测池

检测器中另一个重要部件是检测池，也叫流通池。通常大家关心的一个问题是检测池被堵掉，因为检测池通常不是很耐压，所以一旦被堵就很可能造成损坏。事实上检测池通常不太容易被堵，原因是几乎所有的颗粒杂质都会被色谱柱拦下了，所以堵塞检测器的东西基本都不是来自样品的，很可能是后来“产生”的，比如含盐流动相残留在检测池中导致盐析出。

06.废液

液相色谱仪LC的废液大部分含有有机溶剂，会对人体产生一定的危害，对环境也会产生污染，严禁随意倾倒，应及时处理。目前，国内大部分实验室是将废液送到专门的废液处理站集中进行无害化处理。

总之，对分析仪器来说，避免故障的最主要的做法是正确的操作和调节，切忌盲目操作，对核心部位如离子室、微电流放大器等减少震动和碰撞，保证绝缘，并减少各种系统误差要注意以上要点，但，还要注意日常的仪器保养，色谱柱子的维护，仪器室保持清洁，这样才能使液相色谱处于最佳工作状态，在分析中发挥其重要的作用。