背景

本品为芸香科植物橘及其栽培变种的干燥幼果或未成熟果实的果皮，含有挥发油类、色素类成分。针对这个品种我们推荐固相萃取法3和固相萃取法2结合使用，我们来看看青皮项目的前处理效果吧。

适用范围

本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法方式二和方式三，适用于含色素、挥发油、基质复杂中药材的农残检测

实验步骤

1 对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合1 mL，置20 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用；

1 .2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取青皮空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份），置氮吹仪上，40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL，分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL，加乙腈稀释至1 mL，涡旋混匀，即得。

2  供试品溶液的制备

提取：取青皮粉末（过3号筛）5 g，精密称定，加氯化钠1 g，加入50 mL乙腈，匀浆处理2 min，离心后分取上清液，残渣再加50 mL乙腈，匀浆处理1 min，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5 mL，加乙腈定容至10 mL，摇匀，待净化。

3  净化

GC-MS/MS样品：

SPE柱：SelectCore GCB/NH2-II 固相萃取柱500mg/500mg/6mL

净化：取SelectCore GCB/NH2-II 固相萃取柱500mg/500mg/6mL，用乙腈：甲苯（3：1）10 mL活化，量取上述青皮提取液2 mL，置已活化的固相萃取柱中，用乙腈：甲苯（3：1）15 mL洗脱，收集全部样品液与洗脱液，减压回收至2 mL，即得。

GC-MS/MS测定：精密吸取上清液5 mL，置氮吹仪上于35 ℃水浴浓缩至约0.4 mL，加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0 mL，涡旋混匀，再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

LC-MS/MS样品：

SPE柱：SelectCore HLB固相萃取柱200mg/6mL

净化：量取上述青皮提取液3 mL，过SelectCore HLB固相萃取柱200mg/6mL，收集全部净化液，混匀，即得。

LC-MS/MS测定：精密吸取上清液5 mL，置氮吹仪上于35 ℃水浴浓缩至约0.4 mL，加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0 mL，涡旋混匀，再加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

4  气相色谱-串联质谱法（岛津 GC-MS -TQ8040 NX）

色谱条件

色谱柱：NanoChrom BP-50+MS, 30m×0.25mm×0.25μm；

进样口温度：250 ℃；

升温程序：初始温度为60 ℃，保持1 min；以10 ℃/min升温至160 ℃；再以2 ℃/min升温至230 ℃，最后以15 ℃/min升温至300 ℃，保持6 min；

载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；

进样方式：不分流进样；

恒压模式：146 kPa；

进样量：1 μL

质谱条件

电离方式：电子轰击电离源（EI）；

电离能量：70 Ev；

接口温度：250 ℃；

离子源温度：250 ℃；

监测方式：多反应监测模式（MRM）；

溶剂延迟：10 min

5  高效液相色谱-串联质谱法（岛津 LC-MS 8045）

色谱条件

色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides, 2.6μm,2.1×100mm；

流动相：

A：0.1%甲酸水溶液（含有5 mmol/L甲酸铵）；

B：乙腈-0.1%甲酸水溶液（含有5 mmol/L甲酸铵）=95:5；

流速：0.3 mL/min；

柱温：40 ℃；

进样量：2 µL；

梯度：

质谱条件

离子源：电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描；

监测方式：多反应监测模式（MRM）；

离子源接口电压：4.5 kV；

雾化气：氮气3.0 L/min；

加热气：干燥空气10.0 L/min；

DL温度：250 ℃；

加热模块温度：400 ℃；

接口温度：300 ℃；

干燥气：N₂ 10 L/min

6  实验结果

表（1）青皮中33种农药残留的测定添加回收结果（%）

7 实验讨论

通过以上实验对比数据可以看出，SelectCore GCB/NH₂-II 500mg/500mg/6mL固相萃取柱和SelectCore HLB 200mg/6mL固相萃取柱搭配使用，针对青皮中干扰成分去除效果良好，且各化合物回收都较为良好，为青皮的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。