四环素类药物具有抗菌谱广、价格低的优点，其作为饲料添加剂广泛使用在畜、禽、水产养殖业中；其添加到饲料中，可起到防治疾病和促进生长的作用，但其会在动物体内累积、残留，若是长期食用这些四环素类药物残留的动物性食品，将会危害人类的身体健康。

近期实施的GB 31658.6-2021 食品安全国家标准中，明确了动物性食品中四环素类药物残留测定的前处理方法和液相色谱方法，纳谱分析依照国标，推出四环素类药物前处理所需的SelectCore HLB、SelectCore LCX固相萃取产品及液相色谱检测必备的（ChromCore C18, 5 μm, 4.6×150 mm）色谱柱。

本方法参照GB 31658.6-2021 食品安全国家标准 动物性食品中四环素类药物残留量的测定 高效液相色谱法，适用于猪、牛、羊、鸡的肌肉、肝脏和肾脏，猪、鸡的皮+脂肪，鸡蛋，牛奶，鱼皮+肉，虾肌肉中土霉素、四环素、金霉素、多西环素残留量的检测。

1.1 柠檬酸溶液：称取无水柠檬酸19.21 g，用水溶解并稀释至1000 mL。

1.2 磷酸氢二钠溶液：称取无水磷酸氢二钠28.39 g，用水溶解并稀释至1000 mL。

1.3 Mcllvaine缓冲溶液（pH4.0）：取柠檬酸溶液1000 mL、磷酸氢二钠溶液625 mL，混匀，用盐酸或氢氧化钠溶液调pH至4.0±0.05。

1.4 EDTA·2Na-Mcllvaine缓冲溶液：称取无水乙二胺四乙酸二钠60.5 g，加Mcllvain缓冲溶液1625 mL，溶解，混匀。

1.5 0.01 mol/L草酸溶液：称取0.09 g无水草酸，用水溶解并稀释至100 mL。

1.6 三氟乙酸溶液：吸取三氟乙酸0.8 mL，用水溶解并稀释至1000 mL。

1.7 硫酸溶液：吸取硫酸1.85 mL，用水溶解并稀释至100 mL。

1.8 钨酸钠溶液：称取7.0 g钨酸钠，用水溶解并稀释至100 mL。

1.9 1 mol/L草酸溶液：称取9.0 g无水草酸，用水溶解并稀释至100 mL。

1.10 草酸-乙腈溶液：量取1 mol/L草酸溶液20 mL，用乙腈溶解并稀释至100 mL。

2.1 皮+脂肪

称取试料5 g（精确至±0.02 g），加二氯甲烷15 mL，涡旋1 min，振荡5 min，加EDTA·2Na-Mcllvaine缓冲溶液15 mL，涡旋1 min，振荡5 min，8500 r/min离心5 min，取上清液。下层溶液用EDTA·2Na-Mcllvaine缓冲溶液重复萃取2次，每次15 mL，合并上清液，中性滤纸过滤，备用。

2.2 肌肉、肝脏、肾脏、牛奶、鸡蛋

称取试料5 g（精确至±0.02 g），加EDTA·2Na-Mcllvaine缓冲溶液20 mL，涡旋1 min，振荡10 min，加硫酸溶液5 mL、钨酸钠溶液5 mL，涡旋1 min，8500 r/min离心5 min，取上清液。残渣用EDTA·2Na-Mcllvaine缓冲溶液20 mL、10 mL各提取2次，合并上清液，中性滤纸过滤，备用。

SelectCore HLB 500mg/6mL

• 活化：依次用甲醇、水、EDTA·2Na-Mcllvaine缓冲溶液各5 mL活化；

• 上样：备用液全部过柱，弃去流出液；

• 淋洗：依次用水、5%甲醇溶液各10 mL淋洗，抽干30 s；

• 洗脱：用甲醇6 mL洗脱，收集洗脱液于刻度试管中，加水2 mL，混匀。

SelectCore LCX 500mg/6mL

• 活化：依次用甲醇、水各5 mL活化；

• 上样：SelectCore HLB洗脱步骤中混匀的溶液全部过柱，弃去流出液；

• 淋洗：依次用水、甲醇溶液各5 mL淋洗，抽干1 min；

• 洗脱：用草酸-乙腈溶液6 mL洗脱，收集洗脱液，于40 °C水浴氮气吹至0.5-1.0 mL，再加甲醇0.4 mL，用0.01 mol/L草酸溶液稀释至2.0 mL，微孔滤膜过滤，高效液相色谱测定（上机溶液应在24 h内完成测定）。

Column:           ChromCore C18, 5 μm

Dimension:      4.6×150 mm

Mobile Phase: A）三氟乙酸溶液

                        B）乙腈

Gradient:         t(min)         A            B

                        0.00          90          10

                        5.00          80          20

                        15.00        65          35

                        16.00        90          10

                        17.00        90          10

Flow rate:        1.0 mL/min

Temperature:   30 °C

Injection:         50 μL

Detection:       UV 350 nm

由上图可以看出，猪肉和鸡蛋样品经过纳谱分析SelectCore HLB 500mg/6mL和SelectCore LCX 500mg/6mL两款固相萃取产品处理后，搭配采用ChromCore C18色谱柱对此类四环素进行分离，谱图基线稳定、基质干扰小、各峰峰型良好，加标回收率符合国标要求。

另外按照国标要求进行样品净化时，需将50mL的提取液全部过柱，如果此时固相萃取产品滴速较慢，将消耗大量的时间在过柱上，而纳谱分析的SelectCore HLB、SelectCore LCX固相萃取产品是采用了国际领先科技的单分散聚合物填料，由于细小颗粒得到严格控制（<1%），不容易堵塞筛板而滴速较快，相比其他品牌同类产品要快20%~40%之间，节约时间的同时，回收率也可以保证。