背景

养殖环节用药不当是造成兽药残留的最主要原因，尽管我国农业部对养殖方法有明文规定，但是总有养殖户为了追求最大的经济效益，违背相关法律法规进行养殖，例如将禁用药物（盐酸克伦特罗）当作添加剂添加到猪饲料中，从而引起瘦肉精中毒。兽药残留产生的危害会影响很多方面，最主要的是会在人体内蓄存以致发生急慢性中毒；对于动物体而言，反复接触抗菌药物，其体内的敏感菌株会产生抗药性，使得常规药物在临床上的治疗效果越来越差；其次，接触了药物以后的动物，它们的粪便和尿液随着排泄会稳定的存在于在周围环境中，从而造成环境污染。

适用范围

 本方法（参照GB/T21312-2007）适用于猪肉、猪肝、猪肾、牛奶、鸡蛋等动物源性食品中氟罗沙星、氧氟沙星、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、达氟沙星、奥比沙星、双氟沙星、沙拉沙星、司帕沙星、奥索利酸、萘啶酸、氟甲喹等14种喹诺酮类兽药残留的检测。

实验步骤

1、试剂准备

甲醇（CH₃OH）：色谱纯

乙腈（CH₃CN）：色谱纯

乙二胺四乙酸二钠（EDTA）：色谱纯

甲酸（HCOOH）：色谱纯

水：GB/T 6682规定的一级水

柠檬酸：分析纯

磷酸氢二钠：分析纯

1-1、仪器

1·高效液相色谱-串联质谱仪

2·电子天平：感量0.0001 g

3·电子天平：感量0.01 g

4·旋涡混合器

5·冷冻离心机

6·聚丙烯离心管

7·氮吹仪

8·固相萃取装置

1-2、溶液配制

5%甲醇水溶液：准确量取5 mL的甲醇，倒入100 mL的容量瓶中，用水溶液定容至刻度，摇匀。

0.2%甲酸水：取2 mL的甲酸，加入1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。

0.1%甲酸水：取1 mL的甲酸，加入1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。

0.1 mol/L柠檬酸水溶液：准确称取21.01 g柠檬酸，加入1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀

0.2 mol/L磷酸氢二钠水溶液：准确称取71.63 g磷酸氢二钠，加入1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀

Mcllvaine 缓冲溶液：将1000 mL的0.1 mol/L柠檬酸水溶液与625 mL的0.2 mol/L磷酸氢二钠水溶液混合，必要时用盐酸或者氢氧化钠调节pH为4.0±0.05。

0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液：准确称取60.5 g乙二胺四乙酸二钠，放入1625 mL的Mcllvaine 缓冲溶液中，摇晃混匀。

2、样品提取

牛奶和鸡蛋

称取均质试样5.0 g（精确到0.01 g）置于50 mL离心管中，加入40 mL 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液，1000 r/min涡旋混合1 min，超声提取10 min，10000 r/min离心5 min（温度低于5 ℃），取上清液。

3、净化

SPE柱：SelectCore HLB固相萃取柱（200mg/6mL）

活化：依次用6 mL的甲醇和水活化；

上样：加入提取好的全部上清液；

淋洗：2 mL5%甲醇水溶液进行淋洗，淋洗结束后再减压抽干；

洗脱：6 mL 甲醇溶液进行洗脱，洗脱液在40 ℃下用氮气吹干，用1 mL 0.2%甲酸水复溶后过0.22 μm有机滤膜，上机。

4、液相色谱仪器条件

Column：     ChromCore^TM C18，3μm

Dimension：   2.1×100mm

Mobile phase： A）0.1% Formic acid in D.I. Water （0.1%甲酸水溶液）B）Acetonitrile （乙腈）

Gradient：

Flow rate：    0.4 mL/min

Temperature： 40 °C

Injection：    1 μL

5、质谱条件

离子源: 电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描

监测方式：多反应监测（Multiple Reaction Monitoring，MRM）

雾化气流量：3 L/min

加热器流量：10 L/min

干燥气流量：10 L/min

接口温度：300 ℃

DL温度：250 ℃

加热块温度：400 ℃

6、实验谱图

样品加标回收率实验结果（添加水平为4. 0 μg/kg）

7、实验结论

由以上数据和图谱可知，纳谱分析SelectCore HLB小柱能有效去除杂质的干扰，对目标物质有良好的保留和洗脱能力，回收率也较好，符合国标动物源性食品中14种喹诺酮类兽药残留的检测要求。